凝膠柱色譜也稱為凝膠過濾色譜、分子篩色譜、凝膠滲透色譜(GPC)、排阻色譜。它主要是利用凝膠網狀結構的分子篩作用,根據被分離物分子大小不同進行分離。具有的優點有分離條件溫和,適用于不穩定的分子; 樣品回收率高,幾乎可達100%; 重復性高; 操作的時間相對較短,所需要的設備簡單、經濟。凝膠柱色譜的支持物是多孔凝膠,當不同分子流經凝膠色譜柱時,每個分子不僅是向下移動,而且還在做無定向的擴散運動。分子直徑比凝膠孔徑大的蛋白質分子,不能進入凝膠顆粒的微孔,只能通過凝膠顆粒之間的空隙,這樣的分子是隨溶劑一起移動而分子直徑比凝膠孔徑小的蛋白質分子,能夠自由進人凝膠顆的,故此最先流出柱外。
凝膠色譜儀的工作原理是什么?
樣品通過凝膠柱時,按分子的流體力學體積不同進行分離,大分子先流出。柱后流出物濃度隨保留值的變化,高聚物的平均分子量及其分布,根據所用凝膠的性質,可以分為使用水溶液的凝膠過濾色譜法(GFC)和使用有機溶劑的凝膠滲透色譜法(GPC)。只依據尺寸大小分離,大組分最先被洗提出色譜固定相是多孔性凝膠,只有直徑小于孔徑的組分可以進入凝膠孔道。大組分不能進入凝膠孔洞而被排阻,只能沿著凝膠粒子之間的空隙通過,因而最大的組分最先被洗提出來。